Журнал ветеринарных наук и медицинской диагностики

Одновременное определение триптофана, кинуренина и ниацина в сыворотке крови коров дойного возраста методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с диодной матрицей

Лиана Хютер, Юлия Хартвигер, Кэролайн Дронг, Ульрих Мейер и Свен Денике

Одновременное определение триптофана, кинуренина и ниацина в сыворотке крови коров дойного возраста методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с диодной матрицей

Триптофан является незаменимой аминокислотой и субстратом для важных биохимических путей, например, генерации нейротрансмиттера серотонина или создания кинуренина и никотинамида через кинурениновый путь, который может быть вызван ферментом триптофан 2,3-диоксигеназой (TDO) через глюкокортикоидные гормоны или индоламин 2,3-диоксигеназой (IDO) после иммунной активации. Поскольку соотношение кинуренина и триптофана считается индикатором активированной иммунной системы, мы разработали аналитический метод для одновременного определения кинуренина, триптофана и никотинамида в сыворотке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и оценили их пригодность в качестве маркеров воспаления у молочных коров. Параметры валидации показали, что метод ВЭЖХ соответствует требованиям рутинного анализа триптофана и его метаболитов кинуренина и никотинамида в сыворотке с высокой линейностью в соответствующих рабочих диапазонах и пределах количественного определения 0,41 мкмоль л-1 для никотинамида, 0,43 мкмоль л-1 для кинуренина и 3,40 мкмоль л-1 для триптофана. Внутридневные и междневные колебания составили 2,3 и 3,6% (никотинамид), 3,1 и 6,3% (кинуренин) и 1,9 и 5,2% (триптофан) соответственно. Распад триптофана через кинурениновый путь был исследован у 10 дойных коров в период отела из двух диетических групп в переходный период. Курс концентраций триптофана в сыворотке коровы около отела был аналогичен курсу, обнаруженному у беременных женщин, со снижением до родов, за которым последовало повышение и нормализация концентраций триптофана после родов. Однако повышение концентрации кинуренина и одновременный наклон соотношения кинуренина к триптофану во время беременности не удалось подтвердить в нашем исследовании, за исключением пика соотношения кинуренина к триптофану при родах, который может быть обусловлен активацией печеночного TDO и внепеченочного IDO, вызванной стрессовым гормоном. Дополнительные измерения интерферона-γ и глюкокортикоидов как предполагаемых индукторов TDO и IDO были бы полезны для проверки пригодности соотношения кинуренина к триптофану в качестве иммунного маркера у крупного рогатого скота.