Журнал ветеринарных наук и медицинской диагностики

Разработка иммуноферментного анализа на основе рекомбинантного нуклеокапсидного белка для серологического выявления заболевания зимней дизентерией

Канокван Сингаса, Тависак Сонгсерм, Прида Лертватчарарасаракул, Сирилук Джала, Сакуна Пхаттанакунанан и Пипат Арунвипас

Зимняя дизентерия — острое и заразное вирусное заболевание, которое отрицательно влияет на молочный скот на фермах в Таиланде. Непрямой иммуноферментный анализ (ИФА) на основе рекомбинантного белка нуклеокапсида (rN), который был разработан для обнаружения антител против зимней дизентерии, был произведен с помощью системы экспрессии белка Escherichia coli. Эпитопный антигенный белок N был разработан с использованием почти полных фрагментов гена N (8-430 аминокислот, ген N). Было установлено, что он составляет приблизительно 48 кДа как белок rN и может связывать сыворотку коровьего коронавируса молочного скота с положительным результатом анализа вестерн-блоттинга. Условия метода ИФА были оптимизированы. Белок rN был стандартизирован с концентрацией покрывающего антигена 5 мкг/лунку. Белок rN был протестирован с сыворотками как инфицированного, так и неинфицированного молочного скота. Разведение первичных антител было определено как 1:50 с использованием титрования шахматной доски. Внутри- и межанализы были повторяемыми. Пороговое значение скорректированного значения OD450 от среднего значения ± 2SD (стандартные отклонения) было установлено на уровне 0,049. Процент специфичности, чувствительности и точности между разработанным rNELISA и набором SVANOVIR® BCV-Ab ELISA составил 96,3, 84,8 и 86,1% соответственно. Значение каппа Коэна разработанного ELISA по сравнению с коммерческим набором для тестирования составило 0,71. Коэффициент корреляции значений поглощения из этих двух тестов составил 0,68. Метод ELISA рекомбинантного нуклеокапсидного белка может быть полезен для диагностики и наблюдения за коронавирусом крупного рогатого скота.