Журнал ветеринарных наук и медицинской диагностики

Разработка метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления специфических причин туберкулеза (ТБ) у молочного скота и людей

Хоссейн М.З., Рима Великобритания, Ислам М.С., Хабиб М.А., Чоудхури МГА, Саха ПК, Чоудхури Э.Х. и Хан Махна

Разработка метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления специфических причин туберкулеза (ТБ) у молочного скота и людей

Туберкулез (ТБ) у крупного рогатого скота и человека вызывается M. bovis, M. tuberculosis и M. avium подвид паратуберкулеза (M. paratuberculosis). Отдельные виды молочного скота (N=700) и людей (N=20) были протестированы с помощью туберкулиновых тестов и рентгеновской визуализации. Аспирационная биопсия предлопаточных лимфатических узлов у крупного рогатого скота с положительным результатом туберкулиновой пробы и моча, кашель, плевральная и перитонеальная жидкость у подозреваемого человека были дополнительно протестированы с помощью окрашивания по Цилю-Нильсену. Геномная ДНК у крупного рогатого скота с положительным результатом туберкулиновой пробы (N=23) и подозреваемых людей (N=20) была протестирована с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с таргетингом 16srRNA (1030bp, 180bp). Результаты показали, что 23 крупного рогатого скота и 11 человек были инфицированы туберкулезом. Для выявления инфекционности, вызванной M. bovis и M. tuberculosis, отобранные образцы крупного рогатого скота (N=11) и человека (N=11) были протестированы в однокомпонентной ПЦР с таргетингом генов MPB83 (600 п.н.) и H37Rv Rv3479HP (667 п.н.) соответственно. Результаты ПЦР показали, что все образцы крупного рогатого скота и семь образцов человека генерировали ампликоны, специфичные для гена MPB83, длиной 600 п.н. Две ДНК крупного рогатого скота и семь образцов человека генерировали ампликоны, специфичные для гена H37Rv Rv3479HP, длиной 667 п.н. Семь голов крупного рогатого скота были инфицированы M. bovis, а две — M. tuberculosis. Две головы крупного рогатого скота были коинфицированы M. bovis и M. paratuberculosis. Четыре человека были инфицированы M. bovis, а семь — M. tuberculosis. Ген MPB83 неизменно является общим для M. bovis и M. tuberculosis. Разработанный протокол ПЦР, нацеленный на фрагмент гена H37Rv Rv3479HP (667bp), является селективным для M. tuberculosis. Результаты секвенирования показали точечную мутацию в генах 16srRNA, MPB83 и H37Rv Rv3479HP. Филогенетический анализ выбранных генов M. bovis и M. tuberculosis показал, что организмы принадлежат к Lineage 1. Внутрикожный туберкулиновый тест и микроскопия мазка неспособны дифференцировать инфекционность, вызванную M. bovis или M. tuberculosis. Разработанный метод ПЦР, по-видимому, специфичен для M. tuberculosis, может использоваться для выявления причин туберкулеза у млекопитающих и разработки будущих профилактических стратегий соответствующим образом.