Журнал ветеринарных наук и медицинской диагностики

Применение рекомбинантных антигенов, меченных гистидином, в диагностике вирусных инфекций

Мохаммад М. Хоссейн и Рэймонд Р. Роуленд

Белки с гистидиновой меткой часто обнаруживаются с помощью антителБелки с гистидиновой меткой часто обнаруживаются с помощью антител, специфичных для гистидиновой метки; они полезны в иммунологических исследованиях. Моноклональное антитело (mAb) пента-His использовалось для оценки относительного количества рекомбинантного белка, прикрепленного к каждому набору микросфер в иммуноферментном анализе флуоресцентных микросфер (FMIA). В этом исследовании было протестировано использование анти-His mAb для обнаружения рекомбинантных антигенов из семи различных вирусов животных: вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV), цирковирус свиней типа 2 (PCV2), вирус гриппа свиней (SIV), вирус африканской чумы свиней (ASFV), вирус классической чумы свиней (CSFV), вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV) и вирус лихорадки долины Рифт (RVFV), связанных с микросферами после связывания. Белки были получены как 6xHis-убиквитиновый слитый белок и ковалентно связаны с Luminex MagPlex® полистироловыми, карбоксилированными микросферическими шариками. Целевые антигены были собраны в один мультиплекс и протестированы в присутствии анти-His-tag mAb. Результаты были представлены как средняя интенсивность флуоресценции (MFI). Взаимодействие между His-мечеными рекомбинантными антигенами и анти-His-tag mAb было протестировано с использованием блокирующего пептида His-tag. Результаты анализа блокирования His-tag показали, что 1 мкг/мл блокирующего пептида His-tag может полностью ингибировать взаимодействие His-меченых антигенов и анти-HismAb. Значения MFI для отрицательных образцов сыворотки показали 10-40-кратное снижение по сравнению с положительными сыворотками PRRSV-N, PCV2, SIV, ASFV, CSFV и BVDV. Таким образом, использование анти-His mAb обеспечивает удобный способ оценки связывания антигена с гранулами.