Журнал ветеринарных наук и медицинской диагностики

Амперометрический геносенсор для обнаружения вируса, вызывающего болезнь Марека у домашней птицы

Пунам Нандал, Рахул Хатри, Вишакха Аггарвал, Равина, Минакши Прасад, Хари Мохан и Чандра С. Пундир

5'-тиолированный ДНК-зонд онкогенного гена Meq, состоящий из 24 дезоксинуклеотидов, был восстановлен дитиотреитолом (DTT) и иммобилизован ковалентно через тиолированную связь на золотом электроде с последующей гибридизацией с 1-4 нг/мкл одноцепочечного (ss) ДНК-зонда вируса болезни Марека (MDV) из образца опухоли курицы в течение 10 мин при комнатной температуре. Meqgenosensor мог обнаружить 1 нгсс-ДНК в образцах опухоли за мин с помощью циклической вольтамперометрии (CV), дифференциальной импульсной вольтамперометрии (DPV) и электрохимического импеданса (EI). Модифицированный ssDNA Au-электрод был охарактеризован с помощью инфракрасной Фурье-спектроскопии (FTIR) и сканирующей электронной микроскопии (SEM). Амперометрический геносенсор был сконструирован для обнаружения гена Meq путем соединения модифицированного Au-электрода ssDNA (рабочий электрод) с электродом Ag/AgCl (электрод сравнения) и Pt-проводом (в качестве вспомогательного электрода) через потенциостат. Гибридизация между зондом ssDNA и целевой ssDNA была обнаружена по снижению тока, генерируемого взаимодействием метиленового синего (MB) со свободным G' одноцепочечного олигонуклеотида. Au-электрод ssDNA показал оптимальный ток в течение 10 мин при pH8, 250C. Это первый отчет о создании геносенсора для простого, быстрого и специфичного обнаружения MDV у кур.