Журнал иммунологических методов и инфекционных заболеваний

Создание метода флуоресцентной количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени для обнаружения высокопатогенного вируса птичьего гриппа подтипа H5N1

Мяо-лянь Тан, Юань-юань Ню, Вэй Шуй, Цзяньцун Линь, Мин Ли и Чангрань Чжан

Высокопатогенные штаммы вируса гриппа птиц (AIV), которые являются вирусами гриппа A, вызывают тяжелые заболевания у домашней птицы и людей. Целью данного исследования было создание флуоресцентного количественного ОТ-ПЦР-анализа для обнаружения высокопатогенного вируса гриппа птиц (AIV) подтипа H5N1. Наборы зондов, специфичных для подтипов H5 и N1, были разработаны на основе последовательностей вируса гриппа птиц, обнаруженных в Китае. Две пары праймеров и два флуоресцентных зонда были строго разработаны и оптимизированы в реакционной системе. В соответствии с количеством плазмидной РНК, извлеченной из штаммов H5N1, была построена стандартная кривая DWQBGWDWQBGW флуоресцентной количественной ПЦР, а затем все образцы были протестированы с помощью ПЦР в реальном времени. Тест высокопатогенного подтипа AIV H5N1 был идентифицирован как специфичный, и его уровень чувствительности составил 102~103 копий/реакцию. Стандартная кривая была получена при 109～105 копий ДНК/реакция. От извлечения вирусной РНК до завершения теста потребовалось всего три часа. Анализ был прост в проведении и высоковоспроизводим. В заключение, флуоресцентная количественная ПЦР, описанная здесь, обеспечивает быстрый, специфичный и чувствительный метод обнаружения не только генов H5, но и N1.