Журнал иммунологических методов и инфекционных заболеваний

Оптимизация метода бокового потока для обнаружения собачьего морбилливируса и применение полоски в качестве заменителя образца

Мону Карки*, К.К. Раджак, Правин Сингх, Арфа Фаяз, Киран, Мукеш Бхатт, Вишал Рай, Крис Эйнштейн, Аджай Кумар Ядав и Р.П. Сингх

Чума плотоядных — это новое заболевание, вызываемое собачьим морбилливирусом (CDV) семейства Paramyxoviridae. Вирус превратился в патоген с множественными хозяевами, поскольку поражает многие виды диких животных. Разработка специфических и чувствительных диагностических тестов необходима для программы контроля. Существует несколько диагностических тестов для обнаружения антигена и антител CDV. Анализ бокового потока (LFA) является наиболее перспективным диагностическим тестом в месте оказания медицинской помощи из-за его специфичности, простоты использования и мгновенного результата. Это исследование было разработано для разработки анализа бокового потока с использованием моноклонального антитела (mAb) собственной разработки против нуклеокапсидного белка (N) изолята «CDV/dog/bly/Ind/2018», который представляет циркулирующие штаммы Индии. Два mAb, включенных в исследование, показали высокую аффинность связывания в непрямом ИФА и дот-блот-анализе. Из двух mAb был выбран один из-за его сравнительно более высокой аффинности связывания в формате LFA и меньшего неспецифического связывания с биологической матрицей и компонентами буфера. Свежие клинические образцы, собранные на месте, были отчетливо обнаружены LFA, тогда как хранившиеся образцы со сниженным титром вируса показали противоречивые результаты. Более того, образцы крови показали четкое различие между положительными и отрицательными, чем мазки и гомогенаты тканей. Извлечение РНК из полоски было успешным с некоторыми модификациями в методе извлечения РНК Trizol, и фрагменты генов N и H были амплифицированы. Таким образом, исследование приходит к выводу, что LFA подходит для обнаружения антигена CDV в полевых условиях, и полоски могут использоваться в качестве замены образца для молекулярного исследования.